無公害食品 牛肉

jieming

　　本標(biāo)準(zhǔn)上中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
　　本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國畜產(chǎn)品加工研究會(huì)。
　　本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周光宏、徐幸蓮、孫京新、湯曉艷、黃明、鄒曉葵。
　　1 范圍
　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了無公害牛肉的定義、技術(shù)要求、檢驗(yàn)方法、標(biāo)志、包裝、貯存和運(yùn)輸。
　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于來自非疫區(qū)的無公害肉牛，屠宰后經(jīng)獸醫(yī)檢疫合格的牛肉。
　　2 規(guī)范性引用文件
　　下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
　　GB 191 　包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志
　　GB 2708　　牛肉、羊肉、兔肉衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
　　GB 4789.2　　食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)　菌落總數(shù)測定
　　GB 4789.3　　食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)　大腸菌群測定
　　GB 4789.4　　食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)　沙門氏菌測定
　　GB/T 5009.11　　食品中總砷的測定方法
　　GB/T 5009.12　　食品中鉛的測定方法
　　GB/T 5009.15　　食品中鎘的測定方法
　　GB/T 5009.17　　食品中總汞的測定方法
　　GB/T 5009.19　　食品中六六六、滴滴涕殘留量的測定方法
　　GB/T 5009.44 肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法
　　GB/T 6388　　運(yùn)輸包裝收發(fā)貨標(biāo)志
　　GB 7718 　　食品標(biāo)簽通用標(biāo)準(zhǔn)
　　GB/T 9960　　鮮、凍四分體帶骨牛肉
　　GB 12694　　肉類加工廠衛(wèi)生規(guī)范
　　GB/T 14962　　食品中鉻的測定方法
　　NY 467　　畜禽屠宰衛(wèi)生檢疫規(guī)范
　　NY 5029-2001　　無公害食品　豬肉
　　3 技術(shù)要求
　　3.1 原料
　　活牛原料必須來自非疫區(qū)，經(jīng)當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)合格。
　　3.2 屠宰加工
　　屠宰加工規(guī)范及衛(wèi)生檢驗(yàn)要求按NY 467和GB/T 9960規(guī)定執(zhí)行。
　　3.3 官指標(biāo)
　　感官指標(biāo)應(yīng)符合GB 2708規(guī)定。
　　3.4 理化指示
　　理化指標(biāo)應(yīng)符合表1的要求。

　　表 1 無公害牛肉理化指標(biāo)

項(xiàng) 目	指 標(biāo)
解凍失水率，％ ≤	8
揮發(fā)性鹽基氮， mg ／ 100 g ≤	15
汞 ( 以 Hg 計(jì) ) ， mg/g  ≤	按 GB ／ T9960
鉛 ( 以 Pb 計(jì) ) ， mg ／ kg ≤	0.50
砷 ( 以 As 計(jì) ) ， mg ／ kg ≤	0.50
鎘 ( 以 Cd 計(jì) ) ， mg/g ≤	0.10
鉻 ( 以 Cr 計(jì) ) ， mg/g ≤	1.0
六六六， mg/g ≤	0.10
滴滴涕， mg ／ kg ≤	0.10
金霉素， mg ／ kg ≤	0.10
土霉素， mg ／ kg ≤	0.10
磺胺類 ( 以磺胺類總量計(jì) ) ， mg ／ kg ≤	0.10
伊維菌素 ( 脂肪中 ) ， mg ／ kg ≤	0.04

　　3.5 微生物指標(biāo)
　　微生物指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。
　　表 2 無公害牛肉微生物指標(biāo)

項(xiàng) 目	指 標(biāo)
菌落總數(shù)， cfu ／ g ≤	18*106
大腸菌群， MPN ／ 100 g ≤	1*104
沙門氏菌	不得檢測

　　4 檢驗(yàn)方法
　　4.1 檢驗(yàn)方法
　　按GB/T5009.44規(guī)定方法執(zhí)行。
　　4.2 理化檢驗(yàn)
　　4.2.1 解凍失水率
　　按NY 5029-2001中附錄A執(zhí)行。
　　4.2.2 揮發(fā)性鹽基氮
　　按GB/T5009.44規(guī)定方法測定。
　　4.2.3 鉛
　　按GB/T5009.12規(guī)定方法測定。
　　4.2.4 砷
　　按GB/T5009.11規(guī)定方法測定。
　　4.2.5 鎘
　　按GB/T5009.15規(guī)定方法測定。
　　4.2.6 汞
　　按GB/T5009.17規(guī)定方法測定。
　　4.2.7 鉻
　　按GB/T14962規(guī)定方法測定。
　　4.2.8 六六六、滴滴涕
　　按GB/T5009.19規(guī)定方法測定。
　　4.2.9 金霉素
　　按NY5029-2001中附錄B規(guī)定方法測定。
　　4.2.10 土霉素
　　按NY5029-2001中附錄C規(guī)定方法測定。
　　4.2.11 磺胺類
　　按NY5029-2001中附錄E規(guī)定方法測定。
　　4.2.12 伊維菌素
　　按NY5029-2001中附錄F規(guī)定方法測定。
　　4.3 微生物檢驗(yàn)
　　4.3.1 菌落總數(shù)
　　按GB4789.2檢驗(yàn)。
　　4.3.2 大腸菌群
　　按GB4789.3檢驗(yàn)。
　　4.3.3 沙門氏菌
　　按GB4789.4檢驗(yàn)。
　　5 標(biāo)志、包裝、貯存、運(yùn)輸
　　5.1 標(biāo)志
　　內(nèi)包裝(銷售包裝)標(biāo)志應(yīng)符合GB7718的規(guī)定執(zhí)行，外包裝的標(biāo)志應(yīng)按GB191和GB/T6388的規(guī)定執(zhí)行。
　　5.2 包裝
　　包裝材料符合相應(yīng)的國家食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
　　5.3 貯存
　　產(chǎn)品應(yīng)貯存在通風(fēng)良好的場所，不得在有毒、有害、有異味、易揮發(fā)、易腐蝕的物品同處貯存。
　　5.4 運(yùn)輸
　　應(yīng)使用符合食品衛(wèi)生要求的專用冷藏車(船)，不得有對(duì)產(chǎn)品發(fā)生不良影響的物品混裝。
　　附 錄A
　　(規(guī)范性附錄)
　　解凍失水率的測定
　　A.1 儀器和工具
　　電子秤：感量1g;
　　溫度計(jì)：-10℃-50℃，分度值1.5℃。
　　A.2 抽樣
　　從每批產(chǎn)品中隨機(jī)抽取3-7件。樣品在運(yùn)輸過程中應(yīng)使用保溫設(shè)備，以免解凍流失水份。
　　A.3 測定步驟
　　將鐵絲網(wǎng)置于搪瓷盤內(nèi)，并使鐵絲網(wǎng)與搪瓷盤底部的距離大于2cm。從抽取的樣品中切取的1000g-1200g，用電子秤稱量后置于鐵絲網(wǎng)上。在樣品上覆蓋塑料膜，使樣品在15℃-25℃自然解凍。待樣品中心溫度達(dá)到2℃-3℃時(shí)，用電子秤稱量。再將樣品置于鐵絲網(wǎng)上放置30min，稱量，重復(fù)放置30min再稱量，直至連續(xù)兩次稱量差不超過20g。
　　A.4 測定結(jié)果的表述
　　樣品解凍失水率按式(A.1)計(jì)算：
　　X(%)=m-m1/m×100……………………(A.1)
　　式中：
　　X-樣品解凍失水率，單位為百分率(%);
　　m-樣品解凍前的質(zhì)量，單位為克(g);
　　m1-樣品解凍后的質(zhì)量，單位為克(g)。
　　計(jì)算結(jié)果保留至整數(shù)。 A.5 允許差
　　同一樣的兩次測定值之差，不得超過平均值的5%。
　　附 錄 B
　　(規(guī)范性附錄)
　　金霉素殘留的高效液相色譜測定法
　　B.1 適用范圍
　　本方法用于測定雞和豬的肌肉、肝臟、腎臟和脂肪組織中金霉素的殘留量。
　　B.2 原理
　　組織中金霉素經(jīng)MCI-Vaine-Na2EDTA緩沖液(PH4.0)提取，過濾后，通過C18微柱水洗，用草酸甲醇將藥物洗脫，洗脫液用高效液相色譜儀進(jìn)行測定。
　　B.3 可靠的檢測限
　　本方法在肌肉、肝臟、脂肪和腎臟組織中的檢測限為0.05μg/g。
　　B.4 儀器
　　B.4.1 高效液相色譜儀，配紫外檢測器。
　　B.4.2 勻漿機(jī)。
　　B.4.3 離心機(jī)。
　　B.4.4 旋渦混合器。
　　B.4.5 自動(dòng)電位滴定計(jì)。
　　B.4.6 磁力加熱攪拌器。
　　B.4.7 C18微柱。
　　B.4.8 布氏漏斗。
　　B.4.9 球形漏斗。
　　B.4.10 濾膜：0.45μm。
　　B.4.11 抽濾瓶。
　　B.5 藥品和試劑
　　B.5.1 鹽酸金霉素標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥84%。
　　B.5.2 乙腈：色譜純。
　　B.5.3 甲醇：分析純。
　　B.5.4 乙酸銨：分析純。
　　B.5.5 檸檬酸：分析純。
　　B.5.6 依地酸二鈉：分析純。
　　B.5.7 磷酸氫二鈉：分析純。
　　B.5.8 草酸：分析純。
　　B.5.9 三氟乙酸：分析純。
　　B.5.10 N，N-二甲基甲酰胺：分析純。 B.5.11 草酸銨：分析純。
　　B.5.12 磷酸氫二銨：分析純。
　　B.6 溶液
　　B.6.1 金霉素標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取適量鹽酸金霉素，用甲醇溶解，使成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置冰箱保存。臨用前，取此儲(chǔ)備液，用甲醇依次衡釋成濃度為5.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1、0.05μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
　　B.6.2 MCI-Vaine緩沖液：準(zhǔn)確稱取Na2HPO428.41g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，簡稱溶液A。準(zhǔn)確稱取檸檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，簡稱溶稱液B。取625mL溶液A和1000mL溶解B混勻，調(diào)節(jié)pH至4.0±0.05。
　　B.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液：準(zhǔn)確稱取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI-Vaine液中，使成0.01mol/L Na2EDTA的MCI-Vaine液。
　　B.6.4 0.01mol/L草酸甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取草酸1.26g,用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　B.6.5 0.01mol/L草酸溶液：準(zhǔn)確稱取草酸1.26g，用水溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　B.7 分析
　　B.7.1 提取和純化
　　B.7.1.1 稱取5.00g組織勻漿放入50mL聚丙烯離心管中，添加TCS藥物，使成相應(yīng)的濃度。
　　B.7.1.2 加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液，蓋上帽，漩渦半分鐘，手搖5min。
　　B.7.1.3 4500r/min的速度離心10min，上清液倒入另一離心管，再加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩渦分半分鐘，手搖5min。
　　B.7.1.4 4500r/min的速度離心5min，上清液倒入上個(gè)試管中，再加入10mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液于沉淀中，漩渦半分鐘，手搖5min。
　　B.7.1.5 4500r/min 的速度離心5min，混合全部上清液(共50mL)，4500r/min的速度離心10min。
　　B.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液濕潤抽濾瓶、布氏漏斗及濾紙，用較小真空(水泵)過濾上清液，2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA液洗抽濾瓶在放入注射器中。
　　B.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水沖洗，之后將過濾的液體倒入50mL注射器中，用2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液洗抽濾瓶并放入注射器中。
　　B.7.1.8 過C18微柱，使TCS藥物吸附在C18微柱上。
　　B.7.1.9 用20mL 水沖洗抽濾瓶倒入注射器中，并過濾，水洗C18微柱。
　　B.7.1.10 用水沖洗完全后，頂空5min。
　　B.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS藥物從C18微柱中洗脫于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
　　B.7.1.12 上述液用濾膜過濾后，上高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。
　　B.7.2 測定條件
　　B.7.2.1 色譜柱：C18柱。
　　B.7.2.2 流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(1.5+1.5+2.0,pH=2.0)。
　　B.7.2.3 流速：1.5mL/min。
　　B.7.2.4 檢測波長：350nm.
　　B.7.2.5 進(jìn)樣量：10μL。
　　B.7.3 樣品測定
　　分析樣品按上述儀器操作條件供高效液相色譜儀分析。
　　B.7.4 計(jì)算
　　用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(B.1)計(jì)算試樣中金霉素殘留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(B.1)
　　式中：
　　W-試樣中金霉素殘留量，單位為微克每克(μg/g);
　　H-試樣液中金霉素的峰高，單位為毫米(mm);
　　Hs-標(biāo)準(zhǔn)工作液中金霉素的峰高，單位為毫米(mm);
　　CS-標(biāo)準(zhǔn)工作液中金霉素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);
　　C-最終試樣液所代表的試樣的濃度，單位為克每毫升(g/mL)。
　　注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。
　　附 錄 C
　　(規(guī)范性附錄)
　　土霉素殘留的高效液相色譜測定法
　　C.1 適用范圍
　　本方法用于測定動(dòng)物可食性組織中土霉素的殘留素。
　　C.2 原理
　　組織經(jīng)MCI-Vaine-Na2EDTA緩沖液(pH4.0)提取，過濾后，通過C18微柱水洗后，用草酸甲醇將藥物洗 脫，洗脫液用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。
　　C.3 可靠的檢測限
　　本方法在動(dòng)物可食性組織中的檢測限為0.05μg/g。
　　C.4 儀器。
　　C.4.1 高效液相色譜儀，配紫外檢測器。
　　C.4.2 勻漿機(jī)。
　　C.4.3 離心機(jī)。
　　C.4.4 漩渦混合器。
　　C.4.5 自動(dòng)電位滴定計(jì)。
　　C.4.6 磁力加熱攪拌器。
　　C.4.7 C18微柱。
　　C.4.8 布氏漏斗。
　　C.4.9 球形漏斗。
　　C.4.10 濾膜：0.45μm。
　　C.4.11 抽濾瓶。
　　C.5 藥品和試劑
　　C.5.1 鹽酸土霉素標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥90%。
　　C.5.2 乙腈：色譜純。
　　C.5.3 甲醇：分析純。
　　C.5.4 乙酸銨：分析純。
　　C.5.5 檸檬酸：分析純。
　　C.5.6 依地酸二鈉：分析純。
　　C.5.7 磷酸氫二鈉：分析純。
　　C.5.8 草酸：分析純。
　　C.5.9 三氟乙酸：分析純。
　　C.5.10 N，N-二甲基甲酰胺：分析純。
　　C.5.11 草酸銨：分析純。
　　C.5.12 磷酸氫二銨：分析純。
　　C.6 溶液
　　C.6.1 土霉素標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取適量鹽酸土霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置冰箱中保存。臨用前，取此儲(chǔ)備液，用甲醇依次稀釋成濃度為5.0、0.2、1.0、0.5、0、25、0.1、0.05μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
　　C.6.2 MCI-Vaine緩沖液：準(zhǔn)確稱取Na2HPO428.41g,用水溶解，定容于1000mL,容量瓶中，簡稱溶液A。準(zhǔn)確稱取檸檬酸21.00g，用水溶解，定容于1000mL容量瓶中，簡稱溶液B。取625mL溶液A和1000mL溶液B混勻，調(diào)節(jié)pH至4.0±0.05。
　　C.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液：準(zhǔn)確稱取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI-Vaine液中，使成含0.01mol/L Va2EDTA的MCI-Vaine液。
　　C.6.4 0.01mol/L草酸甲醇：準(zhǔn)確稱取草酸1.26g，甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　C.6.5 0.01mol/L草酸溶液:準(zhǔn)確稱取草酸1.26g，水溶解并定容于1000mL容量瓶中。
　　C.7 分析
　　C.7.1 提取和純化
　　C.7.1.1 稱取5.00g組織勻漿(精確到0.1g)放入50mL聚丙烯離心管中，添加TCS藥物，使成相應(yīng)的濃度。
　　C.7.1.2 加20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液,蓋上帽，漩渦半分鐘，手搖5min。
　　C.7.1.3 以4500r/min的速度離心10min，上清液倒入另一離心管，再加20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩渦半分鐘，手搖5min。
　　C.7.1.4 以4500r/min的速度離心5min，上清液倒入另一離心管，再加10mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中，漩渦半分鐘，手搖5min。
　　C.7.1.5 以4500r/min的速度離心5min,混合全部上清液(共50mL)，以4500r/min的速度離心10min。
　　C.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液濕潤抽濾瓶、布氏漏斗及濾紙，用較小真空(水泵)過濾上清液，2×2ml MCI-Vaine-Na2EDTA液洗抽濾瓶并過濾。
　　C.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇，20mL水沖洗，之后將過濾的液體倒入50mL注射器中，用2×2ml MCI-Vaine-Va2EDTA液洗抽濾瓶并放入注射器中。
　　C.7.1.8 C18微柱，使TCS藥物吸附在C18微柱上。
　　C.7.1.9 用20mL 水沖洗抽濾瓶倒入注射器中，并過濾，水洗C18微柱。
　　C.7.1.10 用水沖洗完全后，頂空5min。
　　C.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS藥物從C18微柱中洗脫于10mL容量瓶中，用水定容至刻度。
　　C.7.1.12 上述液用濾膜過濾后，供高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。
　　C.7.2 測定條件
　　C.7.2.1 色譜柱：C18柱。
　　C.7.2.2 流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(1.5+1.5+2.5)。
　　C.7.2.3 流速：1.5mL/min。
　　C.7.2.4 檢測波長：350nm。
　　C.7.2.5 進(jìn)樣量：10μL。
　　C.7.3 樣品測定
　　分析樣品按上述儀器作條件供高效液相色譜儀分析。
　　C.7.4 計(jì)算
　　用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(C.1)計(jì)算試樣中土霉素殘留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(C.1)
　　式中：
　　W-試樣中土霉素殘留量，單位為微克每克(μg/g);
　　H-試樣液中土霉素的峰高，單位為毫米(mm);
　　Hs-標(biāo)準(zhǔn)工作液中土霉素的峰高，單位為毫米(mm);
　　CS-標(biāo)準(zhǔn)工作液中土霉素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);
　　C-最終試樣液所代表的試樣的濃度，單位為克每毫升(g/mL)。
　　注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。
　　附 錄 E
　　(規(guī)范性附錄)
　　磺胺類藥物在動(dòng)物可食性組織中殘留的高效液相色譜檢測方法
　　E.1 適用范圍
　　本方法用于測定動(dòng)物可食性組織中磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲惡唑(SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺喹惡琳(SQ)單個(gè)或混合物的殘留量。
　　E.2 原理
　　組織經(jīng)乙腈提取后，其上清液再加入正已烷，向離心后的下層溶液加入正丙醇，減壓干燥后的殘留物用乙腈溶解，過Sep-Pak氧化鋁B柱，洗脫液再用正丙醇處理，減壓干燥后的殘留物經(jīng)流動(dòng)相溶解后，所制樣液用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。
　　E.3 可靠的檢測限
　　本方法在動(dòng)物可食性組織中的檢測限為0.05μg/g。
　　E.4 儀器
　　E.4.1 高效液相色譜儀，配紫外檢測器。
　　E.4.2 勻漿機(jī)。
　　E.4.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
　　E.4.4 磁力攪拌器。
　　E.4.5 電子天平：感量0.00001g。
　　E.4.6 離心機(jī)。
　　E.4.7 振蕩器。
　　E.4.8 抽濾器。
　　E.4.9 離心管。
　　E.5 藥品和試劑
　　E.5.1 SMM,SM2,SMZ,SDM,SQ標(biāo)準(zhǔn)：純度≥99%。
　　E.5.2 乙腈：色譜純。
　　E.5.3 甲醇：分析純，經(jīng)重蒸餾。
　　E.5.4 乙酸：分析純。
　　E.5.5 正已烷：分析純，經(jīng)重蒸餾。
　　E.5.6 正丙醇：分析純，經(jīng)重蒸餾。
　　E.5.7 無水硫酸鈉：分析純。
　　E.6 溶液
　　磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取適量各個(gè)磺胺藥，用甲醇溶解，配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用前，取此儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.1μg/mL-20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
　　E.7 分析
　　E.7.1 Sep-Pak氧化鋁B柱的制備
　　稱取高溫下加熱3h的氧化鋁粉，加水?dāng)嚢杈鶆?，振?h后填充入玻璃柱中，用95%乙腈5mL前處理后備用。
　　E.7.2 提取和純化
　　稱取組織樣品5g(精確到0.1g)，加入乙腈25mL，無水硫酸鈉少許(血清除外)，勻漿后以3000r/min的速度離心5min。分離后的殘?jiān)儆?5mL乙腈處理，振蕩10min后，以3000r/min的速度離心5min。合并兩次的上清液，加入正已烷30mL，振蕩10min后，以3000r/min的速度離心5min，取下層液體，加入正丙醇10mL，50℃下減壓干燥，殘留物用95%乙腈3mL溶解，過Sep-Pak氧化鋁B柱。用95%乙腈5 mL過柱，不收集，再用70%乙腈10mL洗脫后，洗脫液中加入5mL正丙醇，50℃下減壓干燥后，殘留物用2.0mL流動(dòng)相溶解，所制樣液用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。 E.7.3 檢測條件
　　E.7.3.1 色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm i.d.。
　　E.7.3.2 流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水-乙酸(2+2+9+0.2)。
　　E.7.3.3 流動(dòng)相流速：1.0ml/min。
　　E.7.3.4 檢測波長：270nm。
　　E.7.3.5 進(jìn)樣量：20μL。
　　E.7.4 樣品測定
　　分別將等體積標(biāo)準(zhǔn)液和試樣溶液注入液相色譜儀，標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣中磺胺類藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。試樣液測定過程中要參插注入標(biāo)準(zhǔn)工作液，以便準(zhǔn)確定量。
　　E.7.5 計(jì)算
　　用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(E.1)計(jì)算試樣中磺胺類藥物殘留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(E.1)
　　式中：
　　W-試樣中磺胺類藥物殘留量，單位為微克每克(μg/g);
　　H-試樣液中磺胺類藥物峰高，單位為毫米(mm);
　　Hs-標(biāo)準(zhǔn)工作液中磺胺類藥物峰高，單位為毫米(mm);
　　CS-標(biāo)準(zhǔn)工作液中磺胺類藥物濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);
　　C-最終試樣液所代表的試樣的濃度，單位為克每毫升(g/mL)。
　　注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。
　　附 錄 F
　　(規(guī)范性附錄)
　　伊維菌素殘留的高效液相色譜測定法
　　F.1 適用范圍
　　本方法用于測定牛、羊、豬肝臟、肌肉和脂肪組織中伊維菌素的殘留量。
　　F.2 原理
　　組織中伊維菌素經(jīng)已腈提取后用C18固相萃取柱凈化，在三氟乙酸酐和N-甲基咪唑存在下，脫水生成熒光化合物，用高效液相色譜儀進(jìn)行測定。
　　F.3 可靠的檢測限
　　本方法在動(dòng)物可食性組織中的檢測限為2ng/g。
　　F.4 儀器
　　F.4.1 高效液相色譜儀，配熒光檢測器。
　　F.4.2 勻漿機(jī)。
　　F.4.3 離心機(jī)。
　　F.4.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氮?dú)獯嫡粞b置。
　　F.4.5 旋渦混合器。
　　F.4.6 SPE柱(C18柱，6mL)。
　　F.5 藥品和試劑
　　F.5.1 伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥90%。
　　F.5.2 乙腈：色譜純。
　　F.5.3 甲醇：色譜純。
　　F.5.4 N-甲基咪唑：純度≥99%。
　　F.5.5 三氟乙酸酐：純度≥99%。
　　F.6 溶液
　　F.6.1 伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取適量伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解，使成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置-20℃冰箱中保存，可保存一年。臨用前，取此儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
　　F.6.2 水-乙腈溶液(9+1)。
　　F.6.3 三氟乙酸酐-乙腈溶液(1+2)。
　　F.6.4 N-甲基咪唑-乙腈溶液(1+1)。
　　F.7 分析
　　F.7.1 提取和純化
　　稱取4.0g組織(精確到0.1g)，加入40mL乙腈，高速勻漿2min，將樣品轉(zhuǎn)至離心管中，以20000 r/min的速度離心10min，沉淀物用乙腈(20mL×2)重復(fù)提取2次，離心后會(huì)并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(60℃)將提取液濃縮蒸去乙腈，向殘留物中添加10mL水，搖勻。
　　C18預(yù)柱依次用4mL乙腈和4mL水-乙腈溶液平衡，使樣品液通過C18柱(1mL/min)，吹去柱內(nèi)殘留的液體，用5mL乙腈洗脫柱內(nèi)吸附的伊維菌素，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去溶劑。向殘留物中依次加入150μL三氟乙酸酐-乙腈溶液和100μL N-甲基咪唑-乙腈溶液，經(jīng)經(jīng)搖勻后密閉、避光存放，30s后即可供高效液相色譜儀測定。
　　F.7.2 測定條件
　　F.7.2.1 色譜柱：C18柱，150mm×4.6mm i.d.，粒度5μm。
　　F.7.2.2 流動(dòng)相：甲醇-水(95+5)。
　　F.7.2.3 流動(dòng)相流速：1.5mL/min。
　　F.7.2.4 熒光檢測：激發(fā)波長364nm，發(fā)射波長470nm。
　　F.7.2.5 進(jìn)樣量：10μL。
　　F.7.3 樣品測定
　　將分析樣品按上述操作條件供高效液相色譜儀分析。
　　F.7.4 計(jì)算
　　用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(F.1)計(jì)算試樣中伊維菌素物殘留量：
　　W=H·CS/HS·C………………………………(F.1)
　　式中：
　　W-試樣中伊維菌素殘留量，單位為微克每克(μg/g);
　　H-試樣液中伊維菌素峰高，單位為毫米(mm);
　　Hs-標(biāo)準(zhǔn)工作液中伊維菌素峰高，單位為毫米(mm);
　　CS-標(biāo)準(zhǔn)工作液中伊維菌素濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);
　　C-最終試樣液所代表的試樣的濃度，單位為克每毫升(g/mL)。
　　注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。

劉廣

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